1、取出酶標(biāo)記板,設(shè)置空白孔,在空白孔中依次加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品。
2、分別標(biāo)記樣品編號(hào),并添加100μL稀釋樣品置于空白微孔中。
3、將酶標(biāo)記板在37℃孵育30分鐘。
4、取出酶標(biāo)簽板,扔掉其中的液體,并在每個(gè)孔充滿所用洗滌劑后立即扔掉液體。
5、在每個(gè)孔填充了應(yīng)用的洗滌劑后,輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)記板30秒,從孔中搖動(dòng)應(yīng)用的洗滌劑,并將酶標(biāo)記板拍干在吸水紙上。
6、重復(fù)步驟55次,并將酶標(biāo)簽板拍干在吸水紙上。
7、將100加入酶標(biāo)記偶聯(lián)溶液的標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔μL中。
8、將96孔板在37℃孵育30分鐘。
9、取出酶標(biāo)簽板,扔掉其中的液體,并在每個(gè)孔充滿所施加的清潔劑后立即扔掉液體。
10、在每個(gè)孔重新填充洗滌劑應(yīng)用溶液后,在室溫下輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)簽板30秒,然后從孔中搖動(dòng)洗滌劑應(yīng)用溶液,并將酶標(biāo)簽板拍干在吸水紙上。
11、重復(fù)步驟55次,并將酶標(biāo)簽板拍干在吸水紙上。
12、將基板A50加入每個(gè)孔μl后立即加入基板B50輕輕搖動(dòng)以混合。
13、酶標(biāo)記板在37℃黑暗中孵育15分鐘。
14、向每個(gè)孔中加入50μL終止溶液,輕輕搖動(dòng)并混合。
15、在酶標(biāo)記上的450nm處測(cè)量OD;顯色后,應(yīng)在15分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量。